殺菌劑對(duì)微生物的活性取決于許多因素，其中些是生物體的內(nèi)在品質(zhì)，其他的是化學(xué)和外部物理環(huán)境。意識(shí)到這些因素應(yīng)該能夠更好地使用消毒和滅菌過程。對(duì)這些和其他因素的更廣泛的考慮可在別處獲得。
微生物的數(shù)量和位置
所有其他條件保持不變，微生物的數(shù)量越多，殺菌劑消滅所有這些物質(zhì)的時(shí)間就越多。當(dāng)他使用相同的測(cè)試條件并且證明花費(fèi)30分鐘殺死10個(gè)萎縮芽孢桿菌（以前的枯草芽孢桿菌）孢子但3小時(shí)殺死100,000個(gè)萎縮芽孢桿菌時(shí)，Spaulding闡明了這種關(guān)系孢子。這加強(qiáng)了在消毒和滅菌之前仔細(xì)清潔醫(yī)療器械的需要。通過精心清洗，減少必須滅活的微生物的數(shù)量，增加按照標(biāo)簽使用殺菌劑時(shí)的安全邊際，并縮短殺滅整個(gè)微生物量所需的暴露時(shí)間。研究人員還發(fā)現(xiàn)聚集或聚集的細(xì)胞比單分散細(xì)胞更難滅活。
當(dāng)評(píng)估影響殺菌劑功效的因素時(shí)，還必須考慮微生物的位置。由于設(shè)備所有部分的消毒劑滲透更加困難，因此必須拆卸多件醫(yī)療器械，并且具有縫隙，關(guān)節(jié)和通道的內(nèi)窺鏡等設(shè)備比平面設(shè)備更難以消毒。只有直接接觸殺菌劑的表面才會(huì)被消毒，所以不得有氣泡，并且設(shè)備必須在整個(gè)暴露期內(nèi)完全浸沒。應(yīng)鼓勵(lì)制造商生產(chǎn)便于清潔和消毒的設(shè)備。
微生物的天然抗性
微生物對(duì)化學(xué)殺菌劑和滅菌過程的抵抗力差別很大。微生物對(duì)消毒劑的內(nèi)在抵抗機(jī)制各不相同。例如，孢子對(duì)消毒劑具有抵抗力，因?yàn)殒咦油鈿ず推悠鹬琳系淖饔�，分枝桿菌有個(gè)蠟質(zhì)細(xì)胞壁，防止消毒劑進(jìn)入，和革蘭氏陰性細(xì)菌具有的外膜對(duì)消毒劑的吸收起到屏障作用。隱含在所有消毒策略中的是考慮到**具抗性的微生物亞群控制滅菌或消毒時(shí)間。也就是說，為了破壞**具抗性的微生物類型（即細(xì)菌孢子），用戶需要使用暴露時(shí)間和實(shí)現(xiàn)完全破壞所需的殺菌劑濃度。除了朊病毒之外，細(xì)菌孢子對(duì)化學(xué)殺菌劑具有**高的固有抗性，其次是球蟲（例如隱孢子蟲），分枝桿菌（例如結(jié)核分枝桿菌），非脂質(zhì)或小病毒（例如脊髓灰質(zhì)炎病毒和柯薩奇病毒），真菌（例如，曲霉菌和念珠菌），營養(yǎng)細(xì)菌（例如葡萄球菌和葡萄球菌）假單胞菌屬）和脂質(zhì)或中等大小的病毒（例如皰疹和HIV）。革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌表現(xiàn)出的殺菌抗性與些例外情況相似（例如銅綠假單胞菌對(duì)某些消毒劑表現(xiàn)出更大的抗性）。與在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基上傳代的細(xì)胞相比，銅綠假單胞菌在其“天然存在”狀態(tài)下對(duì)各種消毒劑的耐受性也明顯更強(qiáng)。立克次體，衣原體和支原體不能置于這種相對(duì)抗性的范圍內(nèi)，因?yàn)殛P(guān)于殺菌劑對(duì)這些藥劑的功效的信息是有限的。因?yàn)檫@些微生物含有脂質(zhì)并且在結(jié)構(gòu)和組成上與其他細(xì)菌相似，所以它們可以被相同的殺滅脂質(zhì)病毒和營養(yǎng)細(xì)菌的殺菌劑預(yù)測(cè)滅活。這個(gè)假設(shè)的個(gè)已知的例外是Coxiella burnetti，它已經(jīng)顯示出對(duì)消毒劑的抗性。
消毒劑的濃度和效力
在其他變量不變的情況下，除了個(gè)例外（碘伏），消毒劑濃度越高，效力越大，實(shí)現(xiàn)微生物殺滅所需的時(shí)間越短。然而，通常不被認(rèn)可的是所有消毒劑都不會(huì)受濃度調(diào)節(jié)的類似影響。例如，季銨化合物和苯酚的濃度指數(shù)分別為1和6; 因此，季銨化合物濃度的減半需要加倍其消毒時(shí)間，但是將苯酚溶液濃度減半需要消毒時(shí)間增加64倍（即，26）。
考慮到殺菌時(shí)間長短取決于殺菌劑的效力，這點(diǎn)也很重要。斯帕爾丁說明了這點(diǎn)，他們用粘蛋白環(huán)測(cè)試證明70％異丙醇在5分鐘內(nèi)破壞了104 結(jié)核分枝桿菌，而同時(shí)使用3％酚類的測(cè)試需要2-3小時(shí)才能達(dá)到相同的微生物殺滅水平。
物理和化學(xué)因素
些物理和化學(xué)因素也影響消毒程序：溫度，pH值，相對(duì)濕度和水硬度。例如，大多數(shù)消毒劑的活性隨著溫度升高而增加，但也存在些例外。此外，溫度過高導(dǎo)致消毒劑降解并削弱其殺菌活性，因此可能會(huì)產(chǎn)生潛在的健康危害。
pH值的增加改善了些消毒劑（如戊二醛，季銨化合物）的抗微生物活性，但降低了其他消毒劑（如酚，次氯酸鹽和碘）的抗菌活性。pH通過改變消毒劑分子或細(xì)胞表面影響抗微生物活性。
相對(duì)濕度是影響氣態(tài)消毒劑/滅菌劑（如EtO，二氧化氯和甲醛）活性的****重要的因素。
由于硬水中的二價(jià)陽離子（例如鎂，鈣）與消毒劑相互作用形成不溶性沉淀物，水硬度（即二價(jià)陽離子的高濃度）降低了某些消毒劑的殺滅速率。
有機(jī)和無機(jī)物質(zhì)
血清，血液，膿液或糞便或潤滑劑材料形式的有機(jī)物可以**少以兩種方式干擾消毒劑的抗微生物活性。**常見的是，干擾通過殺菌劑和有機(jī)物質(zhì)之間的化學(xué)反應(yīng)而發(fā)生，導(dǎo)致殺菌劑或非殺菌劑較少的復(fù)合物，留下較少的活性殺菌劑可用于攻擊微生物。尤其氯和碘消毒劑易于發(fā)生這種相互作用�；蛘撸袡C(jī)材料可以通過充當(dāng)物理屏障來保護(hù)微生物免受攻擊。
無機(jī)污染物對(duì)滅菌過程的影響在20世紀(jì)50年代和60年代進(jìn)行了研究。這些和其他研究表明，微生物無機(jī)污染物對(duì)所有消毒過程的保護(hù)作用都是由鹽晶體中的阻塞引起的。這進(jìn)步強(qiáng)調(diào)了在任何滅菌或消毒程序之前對(duì)醫(yī)療器械進(jìn)行細(xì)致清潔的重要性，因?yàn)橛袡C(jī)和無機(jī)污垢通過清洗容易被清除。
曝光時(shí)間
必須將物品暴露于殺菌劑中以保持適當(dāng)?shù)?*短接觸時(shí)間。多名研究人員已經(jīng)證明低水平消毒劑對(duì)營養(yǎng)細(xì)菌（例如，李斯特菌，大腸桿菌，沙門氏菌，VRE，MRSA），酵母菌（例如念珠菌），分枝桿菌（例如結(jié)核分枝桿菌）和病毒（例如， ，脊髓灰質(zhì)炎病毒），暴露時(shí)間為30-60秒。根據(jù)法律，必須遵守EPA注冊(cè)產(chǎn)品上的所有適用標(biāo)簽說明。如果用戶選擇與EPA注冊(cè)產(chǎn)品標(biāo)簽上的暴露條件不同的暴露條件，則用戶須承擔(dān)因標(biāo)簽外使用而導(dǎo)致的任何傷害的責(zé)任，并可能受到聯(lián)邦殺蟲劑，殺真菌劑和滅鼠劑法案（FIFRA ）。
內(nèi)窺鏡儀器的所有流明和通道必須與消毒劑接觸。氣泡會(huì)干擾消毒過程，漂浮在消毒劑上的物品不會(huì)消毒。消毒劑必須可靠地引入設(shè)備的內(nèi)部通道。由于上述因素對(duì)消毒效果的影響，消毒醫(yī)療用品的準(zhǔn)確時(shí)間有些難以捉摸。某些接觸時(shí)間已被證明是可靠的，但通常較長的接觸時(shí)間比較短的接觸時(shí)間更有效。
生物膜
微生物可以通過生產(chǎn)厚質(zhì)量的細(xì)胞和細(xì)胞外物質(zhì)或生物膜而免受消毒劑的侵害。生物膜是緊密附著在表面上的微生物群落，不能輕易去除。旦這些物質(zhì)形成，它們中的微生物可以通過多種機(jī)制抵抗消毒劑，包括較舊的生物膜的物理特性，細(xì)菌的基因型變異，中和酶的微生物生產(chǎn)以及生物膜內(nèi)的生理學(xué)梯度（例如pH）。與懸浮液中的相同細(xì)菌相比，生物膜內(nèi)的細(xì)菌對(duì)抗菌劑的耐藥性高達(dá)1,000倍。雖然新的去污方法正在研究去除生物膜，氯和氯胺可以有效地滅活生物膜菌。研究人員假設(shè)，聚氯乙烯管內(nèi)壁上的糖萼樣細(xì)胞團(tuán)可以保護(hù)嵌入的生物體免受某些消毒劑的侵害，并成為持續(xù)污染的儲(chǔ)存器。生物膜已在漩渦已發(fā)現(xiàn)，牙科單元水紋，以及眾多的醫(yī)療設(shè)備（例如，隱形眼鏡，起搏器，血液透析系統(tǒng)，導(dǎo)尿管，中央靜脈導(dǎo)管，內(nèi)窺鏡）。他們的存在可能會(huì)對(duì)免疫功能低下患者和留置醫(yī)療設(shè)備的患者產(chǎn)生嚴(yán)重影響。些酶和去污劑可以降解生物中的生物膜或減少活細(xì)菌的數(shù)量，但是沒有產(chǎn)品是EPA登記的或FDA為此目的批準(zhǔn)的。
